嗎啉基氨基的生物活性實(shí)驗(yàn)。將腫瘤細(xì)胞傳代，收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100μL，鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度至5000cell/孔。將培養(yǎng)板移入CO2孵箱中，在37℃、5%CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)，至細(xì)胞單層鋪滿孔底，加入濃度梯度的藥物，藥物梯度稀釋5個(gè)濃度，每孔加入20μLMTT溶液（5mg·mL－1，及 0.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)3～4h。待細(xì)胞呈色后終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。加入150μLDMSO，置搖床上低速振動10min，使結(jié)晶物充分溶解。
在酶聯(lián)免疫檢測儀570nm 處測量各孔OD值。將所有嗎啉原始數(shù)據(jù)（OD值）進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)差（SD）分析，以各組均值替換偏差較大數(shù)據(jù)，計(jì)算出抑制率，根據(jù)藥物濃度及對應(yīng)抑制率應(yīng)用專門軟件得出IC50值。結(jié)果與討論2.1
目標(biāo)產(chǎn)物設(shè)計(jì)和合成 根據(jù)索拉菲尼的結(jié)構(gòu)特征，以它為先導(dǎo)化合物，對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了改造，一共改造了3處取代的位置，即 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3，并且 3
處取代的位置又選擇了不同的取代基。
通過相互組合后，一共設(shè)計(jì)出了26個(gè)目標(biāo)化合物。對于這26個(gè)目標(biāo)化合物，采用通用的實(shí)驗(yàn)方法，都合成出來了，但合成收率有所差異，主要是由于不同取代基的影響。整體而言，Ｒ1對實(shí)驗(yàn)的影響比較小，而Ｒ2、Ｒ3對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響較大。
生物活性檢測生物實(shí)驗(yàn)過程中，采用 MTT法檢測目標(biāo)產(chǎn)物對人肺癌細(xì)胞（H1975 和
A549）、人宮頸癌細(xì)胞（Hela）增殖的抑制活性。采用的陽性對照藥
物為索拉菲尼和舒尼替尼（Sunitinib），整體而言，其抗腫瘤的抑制活性都比較好，但還是存在部分差異，主要是因?yàn)槿〈牟煌?，?dǎo)致藥物跟受體的結(jié)合能力不同所致的?？梢钥闯?，化合物
1－3、1－4、1－7、1－8、1－13、1－14、1－25、1－26 對人宮頸癌細(xì)胞增殖的抑制活性比較好，IC50＜4。22
μmol·L－1，為有效作用?；衔?1－11、1－12、1－19、1－20、1－21、1－22
對人肺癌細(xì)胞H1975和的抑制活性較好，IC50＜4.45μmol·L－1，同樣為有效作用，其他幾個(gè)目標(biāo)化合物抑制活性良好。
初步構(gòu)效關(guān)系研究表明，該類目標(biāo)化合物對 VEGFＲ 2 有一定的抑制作用，但不同 Ｒ2和
Ｒ3，其抑制作用有一定區(qū)別。其中含氮原子少的化合物對人宮頸癌細(xì)胞增殖的抑制活性較好，而含氮原子多的化合物對人肺癌細(xì)胞（H1975和A549）增殖的抑制活性要好些。原因在于含氮少的化合物更容易作用于人宮頸癌細(xì)胞，反之則更容易作用于人肺癌細(xì)胞。